猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis, TGE)是由冠状病毒引起的高度接触性肠道传染病,以呕吐、水样腹泻、脱水和高死亡率为主要特征,尤其对仔猪危害严重。该病传播速度快、发病率高,在规模化养殖场中易造成重大经济损失。早期诊断和精准检测是防控TGE的关键环节,能够帮助养殖场及时隔离病猪、阻断传播链,并为免疫程序调整提供科学依据。通过规范化的实验室检测技术,可明确病原感染状态,区分与其他腹泻性疾病的差异(如猪流行性腹泻、轮状病毒感染等),从而制定针对性防控策略。
猪传染性胃肠炎的检测主要涵盖以下核心项目:
1. 病原学检测:针对病猪粪便、肠道内容物或组织样本中的TGE病毒抗原进行检测,是确诊的直接依据。
2. 血清学检测:通过检测猪血清中的特异性抗体(IgG/IgM),评估群体免疫状态或追溯感染史,适用于流行病学调查。
3. 核酸检测:基于RT-PCR或实时荧光定量PCR技术,检测病毒核酸片段,具有高灵敏度和特异性,可用于早期诊断。
4. 病毒分离培养:将样本接种于敏感细胞系(如猪睾丸细胞),通过细胞病变效应(CPE)确认病毒存在,但耗时较长,多用于研究领域。
常用的TGE检测方法包括:
1. 酶联免疫吸附试验(ELISA):适用于大规模样本筛查,可同时检测抗原和抗体。商品化试剂盒(如IDEXX TGEV Ab/Ag检测试剂盒)操作简便,2-3小时即可获得结果。
2. 反转录聚合酶链反应(RT-PCR):针对病毒S基因或N基因设计引物,可检测低载量病毒。实时荧光定量PCR还能实现病毒定量分析,灵敏度可达102拷贝/μL。
3. 免疫荧光法(IFA):利用荧光标记抗体与病毒抗原结合,通过显微镜观察特异性荧光信号,适用于组织切片或细胞培养物的快速检测。
4. 胶体金试纸条:现场快速检测工具,15分钟内可通过抗原-抗体反应显色判断结果,但灵敏度低于实验室方法。
我国现行标准体系对TGE检测提出了明确要求:
1. 国家标准:依据GB/T 22915-2008《猪传染性胃肠炎病毒核酸检测方法》,规范了RT-PCR技术的操作流程、引物序列和结果判定标准。
2. 行业标准:NY/T 548-2015《猪传染性胃肠炎诊断技术》详细规定了临床诊断、病理学检查及实验室检测的综合判定原则。
3. 生物安全要求:检测过程需符合GB 19489《实验室生物安全通用要求》,病毒分离需在BSL-2级实验室进行,防止病原扩散。
4. 质量控制:每批次检测需设置阳性对照(TGEV标准毒株)和阴性对照(PBS缓冲液),PCR扩增产物应通过测序验证特异性。
国际参考标准包括OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》第2021版中的TGE检测指南,强调多重检测方法联合应用以提高诊断准确性。